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NP-40裂解液是一种比较温和的细胞组织裂解液，NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP和co-IP等。NP-40裂解液的主要成分为50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40以及sodiumorthovanadate，EDTA等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用我司生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

• 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
  
• 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
  
• 用户使用前需加入蛋白酶抑制剂如PMSF或者根据需要再加入Leupeptin，Aprotinin等其它抑制剂。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 对于培养细胞样品：
  
  • 融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
    
  • 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150～250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1～2秒后，细胞就会被裂解。
    对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150--250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必须分装成50～100万个细胞/管，然后再裂解。
    
  • 充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
    裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。
• 对于组织样品：
  
  • 把组织剪切成细小的碎片。
    
  • 融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
    
  • 按照每20毫克组织加入150--250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
    
  • 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
    
  • 充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
    
  • 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
    注：若用于特定用途需要自行添加特定抑制剂或不需要添加抑制剂，对于特定的酶或生物小分子的检测是否兼容需要自行测试，我司不提供具体的应用信息。